Misturas de enantiômeros de alanina, serina, threonina, valina, metionina, leucina e norleucina foram resolvidas cromatograficamente (e reprodutivelmente), através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com fase reversa, por troca de ligantes, utilizando-se L-prolina, L-hidroxiprolina ou N,N-dimetil-L-fenilalanina (2 mmol L-1) e Cu(CH3COO)2 (1 mmol L-1) em água ou em água/metanol. A utilização de água/metanol leva a uma grande diminuição dos tempos de retenção dos α-amino ácidos mais hidrofóbicos, preservando a separação enantiomérica. O pH precisa ser alto o bastante para permitir a presença de grupos –NH2 livres, o que torna a complexação com Cu(II) mais fácil. α-Amino ácidos conformacionalmente mais restritos, como a L-prolina e a L-hidroxiprolina, conduziram a separações enantioméricas menores. A formação de complexos pseudo-homoquirais e pseudo-heteroquirais, por troca de ligantes, que é cinética e termodinamicamente controlada, desempenha um papel fundamental para a separação enantiomérica desejada. Esta metodologia simples e barata pode ser usada em qualquer laboratório envolvido em síntese de α-amino ácidos.
Enantiomeric mixtures of alanine, serine, threonine, valine, methionine, leucine and norleucine were resolved in ligand exchange reversed phase HPLC (reproducibly), by using L-proline, L-hydroxyproline or N,N-dimethyl-L-phenylalanine (2 mmol L-1) and Cu(CH3COO)2 (1 mmol L-1) in water or in water/methanol. The latter mobile phase greatly decreased the retention time of the more hydrophobic α-amino acids, preserving enantioseparation. pH must be high enough to allow the presence of free –NH2 groups in order to make the complexation with Cu(II) easier. The more restricted conformation of L-proline and L-hydroxyproline led to lower enantioseparations. The ligand exchange formation of pseudo-homochiral and pseudo-heterochiral complexes, thermodynamically and kinetically controlled, plays a fundamental role for the desired enantiomeric chromatographic separation. This simple and inexpensive methodology can be used routinely by any laboratory involved in α-amino acid synthesis.